常见问题解答一、微透析技术相关问题解答

1、什么是回收率？

答：实验开始之前需要在体外做物质的回收率，其一是验证探针的性能是否良好，其二需要体外回收率折算成真实的物质浓度。用探针取出来的透析液的浓度与在标准品的浓度的百分比就是回收率。

2、膜长度对回收率的影响？

答：在正常范围内膜越长，流速越低，回收率就越高。

3、中枢神经系统灌注液的pH是多少？

答：为了与脑组织液具有相同的pH值，中枢神经系统灌流液是非缓冲溶液。故其pH值在5-8之间。

4、中枢神经系统灌流液的pH对组织的影响？

答：由于中枢神经系统灌流液无缓冲作用，所以它不会影响组织的pH。灌流液的pH值与周围组织的pH值相同。但是，膜对组织中的缓冲物质的回收率不同，会对组织的pH产生较小的影响。

5、如果探针的截留量是20000道尔顿，为什么分子量是20000道尔顿的物质的回收率不是100 %？

答：分子透过膜的能力随着分子量的增加而呈对数减少。根据经验可得知，当使用截留量是20000道尔顿的膜时，大多数分子量高达5000道尔顿的物质可以被透过，体内环境复杂，这种情况完全依赖于分析方法的实准确性和灵敏度。

二、微透析探针相关问题解答

1、微透析探针的膜长度有哪些？

答：CMA产品有多种规格的探针，膜长度从1 mm到10 mm，可以根据客户实验需求选择，目前CMA产品适用于大多数实验。

2、选择哪种膜材料？

答：低分子截留量的膜可去除大分子物质来纯化样本，高分子截留量的膜可回收大物质，如肽或分子量较小的蛋白质。需要注意的是有些物质可以和膜材料结合。为了优化方案，应使用要检测的物质做体外试验。CMA可提供PAES（聚芳醚砜膜）；铜纺膜；PES（聚醚砜膜）。

3、CMA有多种规格的微透析探针，如何根据实验选择合适的探针？

答：CMA7/8/11/12硬质探针适用于大脑立体定位实验，而柔韧的探针(CMA20)则适用于脂肪组织、肌肉、肝脏或肾脏等外周器官的微透析实验。CMA11和CMA 12均可以用于大鼠的脑部微透析，CMA 7和CMA8均可以用于小鼠的脑部微透析，都是根据分子量来选择不同截流量的探针。CMA 20是一种柔性探针，适用于外周组织和血管。CMA 30和CMA31是线性探针，是一种适用于皮肤和其他外周组织的线性探针，CMA 30分子截留量是6.000道尔顿。CMA31分子截留量是55.000道尔顿。

4、灌注灌流液时泵的流速设定为多少?

答：根据文献设定常规的流速在1ul/min-3ul/min,若想在单位时间内收集更多的体积的液体，应使用高流速。若想获得高浓度的透析液（高回收率），应使用低流速。但需要注意的是低流速收集的透析液体积较小，因此在设定流速时还要考虑分析样本所需用的体积。

5、什么时候才能达到稳态平衡?

答：当植入探针时可能会对组织造成一定的伤害，所以需要让动物恢复两天左右。在实验之前通常灌流探针一个小时可达到平衡。

6、探针可以重复使用吗？

答：在半透膜完好以及体外回收率在10%-20%左右是可以重复使用的，通常使用三次左右。

7、什么时候需要探针导管？

答：在做动物清醒状态下的脑部微透析实验时，需要使用探针导管。

8、怎样连接微透析管路和管路接头？

答：当使用FEP管道时，用锋利的手术刀或类似的物体切割管路，以确保管路末端是开放的。使用后的管路可用去离子水将残留的盐冲洗干净。可将管路接头浸泡在70%的乙醇中使其膨胀，以便与管路和注射器连接。管路接头在空气中会再次收缩，以确保连接的紧密性以及内部体积为零。

9、收集的微透析样品量有问题的原因是什么？

答：原因可能是：探针漏液，管路被堵塞或漏液，泵或者注射器都有可能出了问题。需要一一排查。

10、测定药物浓度对体外回收率的影响，那给药剂量和测定体外回收率时的药物浓度是不是有一定关系？

答：药物浓度对体外回收率的影响较小，体外回收率更多地受到灌流液流速和膜的长度等因素的影响。因此，在测定体外回收率时，给药剂量和测定时的药物浓度之间并没有直接的关系

11、CMA探针的进出口怎么区分？

答：CMA11/12探针短进长出，CMA7和CMA20探针带有颜色的都是蓝色是进口端，透明端是出口端。

12、探针在使用之前可以灭菌吗？

答：因为CMA套管有些是非金属的，所以不可以高温灭菌，如果担心有炎症，使用之前可以喷点酒精消毒即可，因为CMA探针直径很小只有0.24或者0.5mm，炎症反应也很小的。

13、使用微透析探针取的样品很少，如果过滤样品的话就特别费样品

答：我们的探针因为有半透膜的存在，属于天然屏障，把大分子的蛋白或者酶都隔绝了，所以取的样品不用进行前处理，直接进样就可以，如果使用质谱检测的话，可能需要进行除盐处理。

三、实验仪器相关问题解答

泵

1、CMA4004与CMA402区别有哪些？

答：CMA4004是四通道微量注射泵，流速控制范围：0.54pl/min-11.70ml/min。CMA 402的流速控制范围是0.1uL-20uL/min，两个注射器单独运行(注射器可选1mL，2.5mL或5mL)。每个注射器的启动/停止和流速可单独设置。这两种泵都具有“推”、“拉”的双向能力。

2、CMA 120清醒活动系统的作用是什么？

答：清醒动物活动系统可对小型实验动物在其清醒状态下进行长时间的微透析采样实验。

3、CMA402注射泵的量程怎么确定？

答：CMA402泵与注射器的量程要一致，长按Syringe之后显示器上有不同的量程，有1,2.5和5可供选择，选择与注射器一致的量程即可。

RACS

1、RACS清醒活动装置的转速怎么确定?

答：RACS有一个调节转速的按钮，可以根据动物的活动剧烈程度调节，保证动物的管路不发生缠绕即可。